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  • 新品推薦 | 正能快速封閉試劑上架啦~~~

    2022-08-19
    瀏覽次數: 504


    新品上市—正能快速封閉試劑


    Fish Gelatin Fast Blocking Kit 【Powder】

    為什么需要封閉劑?


    用于WB實驗的轉印膜對蛋白質具有高親和力,可以結合和保留需要被轉移的目標蛋白質??贵w本質也為蛋白質,在檢測目標蛋白前,必須使用封閉劑對膜上未被目標蛋白結合的空白區域進行結合、封閉,防止抗體與膜的非特異性導致過高的背景。

    合適的封閉條件可以在增強“抗原-抗體”相互作用的同時顯著降低背景,不充分的封閉會導致過高的背景,而過度的封閉則會導致抗體對抗原的特異性識別受到封閉劑的影響,降低結果的可信度。

    盡管封閉是免疫實驗的關鍵步驟之一,但實驗者往往容易忽視對封閉劑的認真選擇。



    常見的封閉劑及應用要點:


    脫脂奶粉(NFDM)

    脫脂奶粉含有牛奶中的多種蛋白質,如乳清蛋白和酪蛋白,是最常見的封閉劑之一。脫脂奶粉價格低廉、易制備,但需要在使用前應進行過濾以防止微粒與膜結合造成“斑點”背景。

    由于牛奶中含有磷酸化的酪蛋白,可被抗磷酸化酪氨酸的抗體識別,導致抗體的非特異性結合進而形成高背景結果,因此在檢測磷酸化蛋白時,不建議使用脫脂奶粉。此外使用含有生物素(Biotin)的檢測體系時,也不能使用牛奶,因為牛奶也中存在Biotin。

    常規實驗操作是用5% NFDM進行封閉,但當待測蛋白的豐度較低時,高濃度的牛奶會封閉某些抗原表位,讓本就微弱的結果消失殆盡。因此,我們建議此時從較低濃度的脫脂奶粉封閉液開始進行封閉條件摸索(如1% m/v)。

    牛血清白蛋白 (BSA)

    BSA來源于奶牛血清,與牛奶類似,是一種很好的通用封閉劑且易于在實驗室中制備。與含牛奶的緩沖液類似,BSA溶液在使用前應進行過濾以去除顆粒,防止“斑點”背景產生。

    在檢測磷酸化蛋白時,BSA 通常優于牛奶,且用其稀釋配制的抗體工作液不易變性,可以重復使用。BSA 的工作濃度通常為 0.3-5%,其中以3%的濃度最為常見。

    血清(Serum)

    血清通常來源于馬或胎牛,價格比牛奶和BSA更高,不常用作封閉劑。全血清含有多種蛋白質,免疫組化實驗中作為封閉劑使用的血清濃度一般為10%?m/v。

    全血清含有免疫球蛋白,可能與一抗或二抗發生交叉反應導致非特異性背景。但在與樣本物種差異比較大的情況下,血清作為封閉劑的效果仍然較為優秀。

    魚膠(Fish Gelatin)

    魚膠蛋白更常用于免疫組織化學,在WB實驗中,2%魚膠蛋白可用作封閉劑。魚膠相比BSA和牛奶,不會與哺乳動物蛋白質發生交叉反應。由于魚膠含有內源性生物素,它不能與Biotin檢測系統一起使用。


    正能生物快速封閉試劑的優點


    Fish Gelatin Fast Blocking Kit【Powder為粉末狀顆粒,每袋可配制100 ml封閉工作液,2分鐘速溶,無需過濾、操作簡便,其主要成分為高純度的魚膠蛋白,配制成1×工作液后的蛋白濃度為5% m/v,適用于WB,IHC-P,IHC-F,ICC/IF,ELISA實驗的抗體封閉步驟。

    1. 魚膠蛋白為小分子多肽,相比于大分子蛋白,與轉印膜結合效果效果好、封閉效率更高,可有效降低因封閉不足導致的高背景;

    2. 提高信噪比,增強抗體信號,為抗原-抗體結合提供了絕佳的反應環境,能節約抗體使用;

    3. 預混TBST,加入蒸餾水2分鐘速溶,可在15分鐘左右快速完成封閉操作并能保證與常規封閉劑相同的效果,大幅縮短封閉時間。

    ● 封閉效果對比測試?

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    測試抗體:

    #250060?NF-KB p65 (3D2) Mouse mAb;

    #200306-7E4?GAPDH (7E4) Mouse mAb;

    左側:NFDM封閉60分鐘

    右側:快速封閉劑15分鐘

    均在室溫條件下檢測。



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    Fish Gelatin Fast Blocking Kit 【Powder

    貨號:#18004

    應用:WB,IHC-F,IHC-P,ICC/IF,ELISA

    正能生物全新上市魚膠蛋白快速封閉劑,歡迎點擊官網搜索了解產品詳情!


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